Лаборатория клинической иммунологии с группой ОнкоБиоБанк

омплексная оценка показателей клеточного и гуморального иммунитета позволяющая выявить нарушения в работе иммунной системы. Главная функция иммунной системы – контроль за равновесием внутренней среды организма и удаление всех нежелательных вредоносных, чужеродных или генетических неполноценных объектов (вирусы, бактерии, измененные, опухолевые клетки).
Иммунограмма включает в себя оценку популяций лимфоцитов, оценку эффективности фагоцитоза, цитокиновый профиль, оценку сывороточных иммуноглобулинов, белков системы комплимента и циркулирующих иммунных комплексов. По показаниям иммунограмма может быть расширена определением специфических иммуноглобулинов IgE и антител к инфекционным и неинфекционным патогенам, определением Т-регуляторных клеток, обладающих иммуносупрессивным свойством и Т лимфоцитов с различной формой Т клеточного рецептора, указывающих на наличие скрытых, медленно-развивающихся Т-клеточных патологий или скрытых инфекций.

нарушение в функционировании иммунной системы различной степени выраженности от незначительных до существенных, а именно: снижение суммарного количества лимфоцитов, снижение количества В-клеток, отвечающих за развитие гуморального иммунитета, изменение состава NK-клеток и цитотоксических CD8-положительных Т-лимфоцитов, основных эффекторных клеток иммунной системы, увеличение пропорции Т-регуляторных клеток, сопровождающих иммуносупрессию, то есть подавление нормальных иммунных реакций, увеличение пропорции моноцитов. Это лишь немногие изменения в иммунном статусе у онкологического больного.
От степени выраженности изменений на уровне иммунной системы может зависеть успешность комплексного лечения.
Полихимиотерапия или лучевое лечение, проводимые большинству онкологических пациентов дополнительно нарушают функции иммунитета. В настоящее время возможна коррекция ряда показателей иммунной системы как до проведения основного лечения (перед хирургическим лечением, перед химиотерапией или лучевой терапией), так и в процессе лечения. Коррекция нарушений иммунной системы, выявленных при иммунологическом обследовании будет способствовать: более легкому течению послеоперационного периода при хирургическом лечении и сокращению сроков пребывания больного в стационаре, снижению нежелательных явлений во время химиотерапии, снижению нежелательных последствий лучевой терапии. Коррекция показателей иммунитета проводится строго на основании оценки иммунного статуса или расширенной иммунограммы. Курс коррекционной или адаптивной иммунотерапии назначается врачом аллергологом-иммунологом и может быть проведен амбулаторно, без госпитализации в стационар.

определяются врачом аллергологом-иммунологом на основании анамнеза общего анализа крови и биохимических показателей крови. Методы исследования включают в себя: многоцветную проточную цитометрию, иммуноферментный анализ

• при злокачественных новообразованиях;
• в процессе цитостатической, иммунодепрессивной и иммуномодулирующей терапии( то есть химиотерапии или облучения);
• при подготовке к хирургическим вмешательствам;
• в случае осложненного течения послеоперационного или послеродового периода;
• при подозрении на наличие генетически обусловленных дефектов иммунной системы, в том числе при наличии у ближайших родственников аллергических, аутоиммунных, онкологических заболеваний;
• при аутоиммунных болезнях и при аллергических заболеваниях и состояниях;
• при частых рецидивирующих инфекционных заболеваниях и простудах;
• при длительных хронических процессах;
• в случае повышения или напротив снижения количества лимфоцитов в общем анализе крови;

• Для иммунологического исследования (иммунограммы) кровь необходимо сдавать натощак от 8.00 до 10.00 утра (от последнего приема пищи должно пройти 8-10 часов), за 2-3 дня необходимо исключить сильные физические нагрузки.
• ВАЖНО!
• Иммунограмма выполняется в комплексе с общим анализом крови (гемограммой)

• Периферическая кровь (кровь из вены) в количестве 5,0-10,0 мл (в зависимости от числа лейкоцитов крови, по данным предыдущих исследований) забирается в пробирку вакутейнер, стенки которой обработаны специальным реагентом (K2ЭДТА), для того чтобы образец не свернулся. Материал сразу аккуратно перемешивают и доставляют в лабораторию.
• Периферическая кровь из вены в количестве 5,0-10,0 мл забирается в без консерванта/ пробирку для биохимических исследований.
• Пробирки должны находиться в горизонтальном положении.
• При невозможности доставки материала в лабораторию сразу, образец может быть доставлен в течение 12 часов от момента взятия (при условии взятия крови в пробирку-вакутейнер).
• Срок хранения пробы в пробирке-вакутейнере не более 12 часов при комнатной температуре.
• Колебания температурного режима не допустимы!

На бланке направления биологического материала должны быть указаны:

• Фамилия, имя, отчество обследуемого
• Пол, возраст
• Лечебное учреждение, направляющее на исследование
• Предполагаемый диагноз
• Объем исследования
• Проводимая лекарственная терапия

• При отсутствии маркировки на пробирке
• При отсутствии направления
• При наличии сгустка в пробирке с антикоагулянтом
• При несоблюдении сроков, правил доставки и хранения образца
• При частичном гемолизе
• В случае недостаточного объема

Оценка популяций лимфоцитов (клеточное звено иммунитета) 2-3 рабочих дня, гуморальный иммунитет, фагоцитоз, циркулирующие иммунные комплексы, цитокиновый профиль, маркеры активации — от 3 до 10 рабочих дней.
Исследуемый материал периферическая кровь (кровь из вены).

необходимый диагностический этап при остром лейкозе или лимфоме. Это комплексная характеристика типа клеток. С использованием иммунологических методов возможно выявление особых структур, антигенов, на поверхности клетки (как правило, белковых молекул, так называемых CD (claster differentiation), кластер дифференцировки). Комплекс данных антигенов составляет иммунологический фенотип (иммунофенотип) на основании которого каждая клетка может быть отнесена к определенному классу: негемопоэтическая, гемопоэтическая, миелоидная, лимфоидная, T-клетка, В-клетка, клетка-предшественник. В соответствии с иммунофенотипом определяется иммунологический вариант заболевания, что является принципиальным для выбора правильной терапии на этапе диагноза.
В ходе проведения специализированной терапии важно отследить её эффективность. Для целого ряда опухолевых заболеваний крови (лимфобластные острые лейкозы, периферические В-клеточные лимфомы) оценка эффекта от лечения также основана на иммунологических подходах, то есть на иммунофенотипировании.

В основе иммунофенотипирования лежит классическая иммунологическая реакция антиген-антитело. Клетки исследуемого материала (клетки периферической крови, клетки костного мозга, плевральной жидкости, выпотных жидкостей) инкубируют со специфичными моноклональными антителами, соединенными (коньюгированными) со специальными красителями. По окончании инкубации, результаты реакции оцениваются методами проточной цитометрии. Если образовался комплекс антиген-антитело, то клетка становится видимой для лазерного луча клеточного анализатора ( проточного цитометра) и расценивается как антиген-положительная по конкретному маркеру. Для того чтобы со 100% уверенностью говорить о природе клетки, необходима оценка от 5 до 10 маркеров, как правило это достигается использованием многоцветной проточной цитометрии. Таким образом, определяется совокупный иммунологический фенотип клеток, и формируется иммунологический диагноз, то есть вариант острого лейкоза или лимфомы.

Иммунофенотипирования при первичной диагностике определяются врачом гематологом, важным признаком служит выявление изменений в общем анализе крови и/или в составе костного мозга (миелограмме)
Показания к назначению иммунофенотипирования при мониторинге остаточной опухоли (минимальная остаточная болезнь)
определяются врачом гематологом в соответствии с проводимыми схемами лечения, как правило

• При острых лимфобластных лейкозах у взрослых на 30 и 70 дни специфической терапии
• При острых лимфобластных лейкозах у детей на 15 и 30 дни индукционной химиотерапии
• Оценка эффекта терапии при лимфомах и в частности при В-клеточном хроническом лимфолейкозе проводится только тогда когда кроветворение (конкретно количество В-клеток) восстановилось после окончания специфической терапии, то есть не раньше!! через 5-6 месяцев от окончания лечения.

Иммунофенотипирование, это только часть диагностического комплекса, данное исследование в случае установления диагноза острого лейкоза должно выполняться одновременно с морфо-цитохимическим и цитогенетическим исследованиями. В случае диагноза лимфомы данные иммунофенотипического исследования должны быть подтверждены морфологическим и/или иммуно-гистохимическим исследованием ткани лимфатических узлов.
Исключением является В-клеточный хронический лимфолейкоз, для данного типа лимфомы диагноз устанавливается на основании иммунофенотипирования клеток крови и костного мозга и иммуногистохимического или морфологического подтверждения не требуется.

Периферическая кровь (кровь из вены) в количестве 2,0-5,0 мл (в зависимости от числа лейкоцитов крови) забирается в пробирку вакутайнер, стенки которой обработаны специальным реагентом (K2ЭДТА), для того чтобы образец не свернулся.
Костный мозга получают амбулаторно или в стационаре путем аспирационной биопсии в объеме 0,3-0,8 мл (не более!!, чтобы избежать примеси периферической крови) и также помещают в вакутайнер с K2ЭДТА.
Материал сразу аккуратно перемешивают и доставляют в лабораторию.
При невозможности доставки материала в лабораторию сразу, образец может быть доставлен в течение 12 часов от момента взятия.
Срок хранения пробы в пробирке-вакутайнере не более 12 часов при комнатной температуре (колебания температурного режима не допустимы). Срок выполнения иммунофенотипирования 2 рабочих дня, подготовки к исследованию не требуется.