Иммунофенотипирование при лейкозе, лимфоме

Необходимый диагностический этап при остром лейкозе или лимфоме. Это комплексная характеристика типа клеток. С использованием иммунологических методов возможно выявление особых структур, антигенов, на поверхности клетки (как правило, белковых молекул, так называемых CD (cluster differentiation), кластер дифференцировки). Комплекс данных антигенов составляет иммунологический фенотип (иммунофенотип), на основании которого каждая клетка может быть отнесена к определенному классу: негемопоэтическая, гемопоэтическая, миелоидная, лимфоидная, T-клетка, В-клетка, клетка-предшественник. В соответствии с иммунофенотипом определяется иммунологический вариант заболевания, что является принципиальным для выбора правильной терапии на этапе диагноза.

В ходе проведения специализированной терапии важно отследить ее эффективность. Для целого ряда опухолевых заболеваний крови (лимфобластные острые лейкозы, периферические В-клеточные лимфомы) оценка эффекта от лечения также основана на иммунологических подходах, то есть на иммунофенотипировании.

car t терапия взятие материала НМИЦ радиологии

Методы исследования

В основе иммунофенотипирования лежит классическая иммунологическая реакция антиген–антитело. Клетки исследуемого материала (клетки периферической крови, клетки костного мозга, плевральной жидкости, выпотных жидкостей) инкубируют со специфичными моноклональными антителами, соединенными (конъюгированными) со специальными красителями. По окончании инкубации результаты реакции оцениваются методами проточной цитометрии. Если образовался комплекс антиген–антитело, то клетка становится видимой для лазерного луча клеточного анализатора (проточного цитометра) и расценивается как антиген-положительная по конкретному маркеру. Для того чтобы со 100% уверенностью говорить о природе клетки, необходима оценка от 5 до 10 маркеров — как правило, это достигается использованием многоцветной проточной цитометрии. Таким образом, определяется совокупный иммунологический фенотип клеток и формируется иммунологический диагноз, то есть вариант острого лейкоза или лимфомы.

Показания к назначению

Иммунофенотипирования при первичной диагностике определяются врачом-гематологом, важным признаком служит выявление изменений в общем анализе крови и/или в составе костного мозга (миелограмме).

Показания к назначению иммунофенотипирования при мониторинге остаточной опухоли (минимальная остаточная болезнь). Определяются врачом-гематологом в соответствии с проводимыми схемами лечения, как правило.
При острых лимфобластных лейкозах у взрослых на 30-й и 70-й дни специфической терапии.
При острых лимфобластных лейкозах у детей на 15-й и 30-й дни индукционной химиотерапии.

Оценка эффекта терапии при лимфомах, и в частности при В-клеточном хроническом лимфолейкозе, проводится только тогда, когда кроветворение (конкретно количество В-клеток) восстановилось после окончания специфической терапии, то есть не раньше чем через 5–6 месяцев от окончания лечения.

ВАЖНО!

Иммунофенотипирование — это только часть диагностического комплекса, данное исследование в случае установления диагноза острого лейкоза должно выполняться одновременно с морфо-цитохимическим и цитогенетическим исследованиями. В случае диагноза лимфомы данные иммунофенотипического исследования должны быть подтверждены морфологическим и/или иммуногистохимическим исследованием ткани лимфатических узлов.
Исключением является В-клеточный хронический лимфолейкоз, для данного типа лимфомы диагноз устанавливается на основании иммунофенотипирования клеток крови и костного мозга, и иммуногистохимического или морфологического подтверждения не требуется.

Правила забора материала

Периферическая кровь (кровь из вены) в количестве 2,0–5,0 мл (в зависимости от числа лейкоцитов крови) забирается в пробирку-вакутайнер, стенки которой обработаны специальным реагентом (K2ЭДТА), для того чтобы образец не свернулся.
Костный мозга получают амбулаторно или в стационаре путем аспирационной биопсии в объеме 0,3–0,8 мл (не более, чтобы избежать примеси периферической крови) и также помещают в вакутайнер с K2ЭДТА.
Материал сразу аккуратно перемешивают и доставляют в лабораторию.
При невозможности доставки материала в лабораторию сразу, образец может быть доставлен в течение 12 часов от момента взятия.
Срок хранения пробы в пробирке-вакутайнере не более 12 часов при комнатной температуре (колебания температурного режима недопустимы). Срок выполнения иммунофенотипирования — 2 рабочих дня, подготовки к исследованию не требуется.